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显微镜玻片标本的制作方法

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更新时间 : 2019-10-21 11:17:31

制作玻片标本对认识生物体的形态结构具有重要意义。玻片标本有临时玻片标本(如涂片、压片、临时装片)和永久玻片标本(如永久装片、切片)。

1.涂片法

涂片法是将材料均匀地涂布在载玻片上的一种制片方法。

涂片材料有单细胞生物、小型藻类、血液、细菌培养液、动植物的疏松组织、精巢、花药等。

涂片时应注意:(1)载玻片必须清洁。(2)载玻片要持平。(3)涂层须均匀。涂抹液滴在载玻片中间偏右,用解剖刀刃或牙签等涂匀。(4)涂层要薄。用另一载玻片作推片,沿滴有涂抹液的载玻片面(二载玻片夹角应为30°~45°)由右向左轻轻推动,涂成均匀一薄层。(5)固定。如需固定可用化学固定剂或干燥法(细菌)固定。(6)染色。细菌用亚甲基蓝,血液用瑞氏染液。染色液要盖住全部涂面。(7)冲洗。用吸水纸吸干或烤干。(8)封片。长期保存用加拿大的树胶片。

2.压片法

压片法是将生物材料置于载玻片和盖片之间,施加一定压力,将组织细胞压散的一种制片方法。

压片法的一般过程:

(1)取材。观察细胞分裂,应选取细胞分裂旺盛、新鲜的组织细胞为材料。如根尖、茎尖分生组织、骨髓细胞、花药(花粉母细胞)。精巢(精母细胞)等。

(2)固定。材料固定可根据需要而定,取材后立即压片观察,可不作单独固定处理(与染色同步进行);取材后不立即视察,可将材料用固定液(一般用醋酸酒精固定液)固定。固定2~24小时(因材料而异)后用95%乙醇清洗,保存于70%乙醇中,备用。

(3)离析。对细胞不易散开材料用水解分离液(如1N HCl或盐酸一酒精液)处理,一般处理6~20min,解离后经水漂洗后方能染色。

(4)染色。染色剂种类很多。观察染色体常用醋酸洋红染色液染色。

(5)压片。将材料放在载玻片上,加一滴清水或染液,盖上盖玻片用拇指轻轻压片。

6)观察。压片后,即可在显微镜下观察。

3.装片法

装片法是将生物材料采取整体封固制成玻片标本的方法,用此法可制成临时或永久装片。

装片材料有:微小生物如衣藻、水绵、变形虫、水螅,植物的叶表皮;昆虫的翅、足、口器,人的口腔上皮细胞等。

装片法制作时应注意:

1)手持载玻片时,应注意持平,或放在平台上。滴水时水量要适当,以恰好被盖玻片盖满为度。(2)应将材料用解剖针或镊子展开不使重叠,展平在同一平面上。

3)放盖玻片时,从一侧慢慢盖在水滴上,防止出现气泡。

4)染色时,将一滴染色液滴在盖玻片的一侧,用吸水纸从另一侧吸引,使盖玻片下的标本均匀着色。着色后,用同样的方法,滴一滴清水,把染色液吸出后,在显微镜下观察。